緩衝液（バッファー）の調製方法

緩衝液（バッファー）を調製する利点

緩衝液（バッファー）は、すでに調製済みの製品が多数販売されていますが、試薬を購入しご自身で調製することも可能です。
既製品とは違い、ご自身で調製することで、濃度やpHを細かく調整できる利点があります。また、必要量のみ調製することができ、比較的安価で抑えられます。

この特集では、緩衝液（バッファー）を調製する際のポイントや、代表的な緩衝液の調製方法を解説します。
当社では、緩衝液の原料として使える試薬を多数ご用意しておりますので、ぜひご活用ください。

緩衝液（バッファー）を調製する際のポイント

緩衝液（バッファー）をご自身で調製する際、濃度調製や、温度、保存方法など、気をつけなければならないポイントがあります。

なるべく低濃度で調製する

緩衝液（バッファー）の濃度が高くなれば、緩衝作用も高くなりますが、その分反応や測定への影響も大きくなります。
特に生化学的反応では、緩衝物質の酵素活性や基質、補酵素との反応など、活性・安定性に影響するため、pHを保てる最小濃度の緩衝液を使用することが推奨されています。

また、緩衝液を希釈すると、イオン強度の変化に伴いpHも変化します。一般的に、弱塩基を用いた緩衝液はpHが小さくなり、弱酸を用いた緩衝液はpHが大きくなります。緩衝液は使用時に調製することを推奨していますが、ストックのために緩衝液を調製する際も、希釈して使用する場合には、最終濃度は目的のpHになるようにしてください。

実際に使用する温度で調製する

溶液の温度が上がると、緩衝作用を発揮する物質のpKaの値はわずかに小さくなり、緩衝液（バッファー）のpHに影響します（温度依存性）。特に、塩基性pHの緩衝液では、水のpKwにも影響されるため、pHの温度依存性が大きくなります。
pHの変化に敏感な実験を行う際は、実際に使用する温度を想定したpH調整が必要です。

溶液の温度とpHの関係（ほう酸緩衝液）

pH標準液と各温度のpH

温度（℃）	pH値
温度（℃）	フタル酸塩	中性リン酸塩	ほう酸塩
0	4.01	6.98	9.46
5	4.01	6.95	9.39
10	4.00	6.92	9.33
15	4.00	6.90	9.27
20	4.00	6.88	9.22
25	4.01	6.86	9.18
30	4.01	6.85	9.14
35	4.02	6.84	9.10
40	4.03	6.84	9.07

密封容器での保存

緩衝液（バッファー）は時間が経つにつれ、細菌・カビなどの微生物の発生や、沈殿が見られる場合があります。また、塩基性の緩衝液は、大気中の二酸化炭素を吸収するため、pHが酸性側に傾きます。

これらを防ぐためには、フィルター（2.0～0.45μm）でろ過した緩衝液を滅菌済みの密封容器に入れ、保存すると効果的です。
高圧滅菌（オートクレーブ、120℃で20分程度）してから保存すると、さらに微生物による汚染を防ぐことができるので、比較的長期間の保存が可能です。